背景:

       由于轉(zhuǎn)移酶、尤其是激酶的生理相關(guān)性、多樣性和普遍存在，它們成為生化和醫(yī)學(xué)研究中最重要并被廣泛研究的一類酶家族。許多目前可用的激酶測定使用在反應(yīng)期間消耗大量ATP的酶而運行良好，但對檢測ATP量的少量變化而言則不夠靈敏，這限制了具有低ATP周轉(zhuǎn)率的激酶（例如生長因子受體激酶）的檢測，因此需要一種高靈敏度測定方法來篩選低活性激酶。

概述:

      Rhinogen^? Kinase-Turbo? ADP激酶活性檢測試劑盒是一種發(fā)光型ADP檢測試劑盒，它提供了一種通用、均質(zhì)、高通量的篩選方法通過量化激酶反應(yīng)過程中產(chǎn)生的ADP量來測量激酶活性。Rhinogen^? Kinase-Turbo? ADP激酶活性檢測試劑盒可用于監(jiān)測幾乎所有能產(chǎn)生ADP的激酶的活性。Rhinogen^? Kinase-Turbo? ADP激酶活性檢測試劑盒可檢測使用0-10μM ATP的酶（如激酶或ATP酶）的活性。ADP激酶測定在多孔板中進(jìn)行，可在低至5μl的反應(yīng)體積內(nèi)檢測激酶活性。

圖1. Kinase-Turbo? ADP激酶活性檢測試劑盒原理

         檢測分兩步進(jìn)行：
        1）首先，在激酶反應(yīng)后，加入等體積的First reagent試劑以終止激酶反應(yīng)并耗盡剩余的ATP。
        2）其次，加入Second reagent試劑，同時將ADP轉(zhuǎn)化為ATP，并利用熒光素酶/熒光素反應(yīng)測量新生成的ATP。產(chǎn)生的發(fā)光信號用酶標(biāo)儀測量。通過ATP到ADP的轉(zhuǎn)換曲線，可將發(fā)光值與ADP濃度相關(guān)聯(lián)。

圖2. Kinase-Turbo? ADP激酶活性檢測試劑盒檢測流程圖

          這種檢測方法的靈敏度足以檢測到極低量的ADP，并可在含有10μM ATP（圖3）和1μMATP（圖4）的反應(yīng)中以線性方式檢測生成的ADP。所產(chǎn)生的發(fā)光信號與所產(chǎn)生的ADP濃度成正比，并與激酶活性相關(guān)。

圖3. ADP激酶檢測的線性情況（10μM）

圖4. ADP激酶檢測的線性情況（1μM）

試劑包裝:

         Rhinogen^? Kinase-Turbo? ADP 激酶活性檢測試劑盒包裝規(guī)格如下：
         注：可用于96 孔板（25μl：25μl：50μl），足夠進(jìn)行200T

        Rhinogen^? Kinase-Turbo? ADP 激酶活性檢測試劑盒具體組分如下：

應(yīng)用:

        Rhinogen^? Kinase-Turbo? ADP激酶活性檢測試劑盒幾乎可以使用任何激酶和底物組合，而且不需要放射性標(biāo)記的成分或抗體。激酶底物可以是肽、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或糖。由于Rhinogen^? Kinase-Turbo? ADP激酶活性檢測試劑盒測定法靈敏度高，基本上可用于所有激酶，尤其是酶周轉(zhuǎn)率低的激酶，如生長因子受體酪氨酸激酶。因此，該檢測法是高通量篩選的理想選擇，因為少量的酶和較低的ATP-ADP轉(zhuǎn)化率就能產(chǎn)生較高的信號-背景比。
       Rhinogen^? Kinase-Turbo? ADP激酶活性檢測試劑盒可產(chǎn)生穩(wěn)定的發(fā)光信號，并在各種檢測條件下提高性能。加入Second reagent后，熒光素酶反應(yīng)產(chǎn)生的信號可穩(wěn)定持續(xù)3小時以上。由于穩(wěn)定性更強，因此不需要配備注射器的熒光測定儀，也可對多個平板進(jìn)行批量處理。此外，熒光素酶與First reagent試劑和Second reagent檢測試劑專有配方的獨特組合，使其發(fā)光效果比其他基于熒光素酶或熒光的檢測方法更不易受文庫化合物的干擾。

產(chǎn)品特性:

       1.動態(tài)范圍大：在ATP與ADP的轉(zhuǎn)換率較低時，信號與背景的比率較高，因此可以使用較少量的酶；
       2. 靈敏度高：檢測1nmol ADP的靈敏度是背景靈敏度的2倍以上；
       3. 通用檢測：可使用任何激酶和激酶與底物的組合，包括肽、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和糖底物；
       4. 正相關(guān)：檢測信號隨生成物的增加而線性增加；
       5. 基于發(fā)光的ADP檢測：減少化學(xué)物質(zhì)對整個檢測過程的干擾；
       6. 批量平板處理：發(fā)光信號高度穩(wěn)定，3小時后信號增加比例小于20%；
       7. 均一、穩(wěn)健、無放射性的檢測方法。

保存條件:

       采用干冰運輸，收到產(chǎn)品后請立即置于-20℃及以下條件下儲存。使用前，先將所有組分置于室溫條件下完全解凍混勻。未使用完的組分進(jìn)行分裝，并置于-20℃及以下條件下儲存。First reagent和Second reagent可在室溫（22℃）下放置24小時而不會失去信號。