背景:
巖藻糖是許多寡糖(O或N-連)和多糖結(jié)構(gòu)以及糖蛋白和糖脂的重要組成部分,它們通常與各種生物事件有關(guān),包括受精、胚胎發(fā)生、細(xì)胞凋亡、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和疾病進(jìn)展,如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎癥、癌癥及囊性纖維化。糖綴合物的去巖藻糖基化是了解糖綴合物生物學(xué)效應(yīng)的重要過程。
α1-2巖藻糖苷酶是一種高度特異性的外糖苷酶,它催化從低聚糖中水解線性α1-2連接的l -巖藻糖基(線性底物被定義為相鄰的殘基上沒有分支)。
Rhinogen? α1-2 Fucosidase是利用大腸桿菌系統(tǒng)表達(dá)并經(jīng)過多步層析純化得到的重組糖苷酶,分子量大小約為97.7kD。中性條件具有活性,在37℃下獲得最佳反應(yīng)活性。根據(jù)消化底物不同可適當(dāng)延長反應(yīng)時間。
產(chǎn)品包裝:
Rhinogen? α1-2 Fucosidase(α 1-2巖藻糖苷酶)包裝規(guī)格如下:
目錄號 |
規(guī)格 |
濃度 |
QPF-013-A |
1000units |
2000units/ml |
配套試劑:
Rhinogen? α1-2 Fucosidase(α 1-2巖藻糖苷酶)配套提供的試劑如下:
目錄號 |
試劑 |
成分 |
EB10 |
10×Glyco緩沖液3 |
200mM Tris,pH6.8 |
產(chǎn)品來源:
重組表達(dá)于E. coli,理論分子量約97.7KD,C端帶6×His標(biāo)簽。
產(chǎn)品質(zhì)量:
SDS-PAGE分析,純度≥95%;沒有檢測到污染的外切糖苷酶、糖苷內(nèi)切酶及蛋白酶活性。
產(chǎn)品特性:
α1-2 巖藻糖苷酶是一種高度特異性的外切糖苷酶,可催化水解糖蛋白或游離寡糖上α1-2 連接的巖藻糖。
酶活定義:
在 20 mM Tris pH 6.8 中在 37℃下孵育 30 分鐘,一個單位的 Rhinogen? α 1-2 Fucosidase可從≥90% 的 11 nmol 2'-fucosyllactose中水解巖藻糖。
保藏條件:
1. 采用冰袋運(yùn)輸, 收到產(chǎn)品后請立即將酶置于-20℃;配套試劑置于-20℃儲存。
2. 本品不含防腐劑,務(wù)必確保無菌操作取用,避免污染。
應(yīng)用:
1. 聚糖結(jié)構(gòu)分析;
2. 治療性重組蛋白的表征及質(zhì)量控制;
3. 消除糖蛋白的異質(zhì)性。
特性:
Rhinogen? α1-2 Fucosidase是一種高度純化和非常穩(wěn)定的外切糖苷酶,具有穩(wěn)定性高、與下游檢測兼容等特點(diǎn)。
1. 高純度:沒有污染蛋白酶/其它糖苷酶,純度≥95%;
2. 高穩(wěn)定性:每批產(chǎn)品都經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制,以實現(xiàn)產(chǎn)品批間穩(wěn)定性;
3. 與下游 HPLC、質(zhì)譜兼容:不含甘油,酶切體系與 HPLC 及質(zhì)譜工作流程環(huán)境兼容。
推薦使用方法:
1. 取1μg糖蛋白或者100nM寡糖樣品,加純化水至反應(yīng)體系為9μl;
2. 加入1μl 10×Glyco緩沖液3;
3. 加入1-2 μl Rhinogen? α1-2 Fucosidase,輕柔混勻;
4. 37°C 條件下反應(yīng)1小時。
注意:根據(jù)底物類型適當(dāng)優(yōu)化酶的濃度和孵育時間。
操作說明:
1. 對于不同的糖蛋白樣品,需要實驗摸索最適的酶濃度及反應(yīng)時間;
2. 反應(yīng)可以線性放大或縮小;
3. 對于不同的糖蛋白樣品,所需酶量需要進(jìn)行適當(dāng)優(yōu)化或根據(jù)經(jīng)驗確定最優(yōu)的操作方法。在10~25μl反應(yīng)體系中,對于1μg糖蛋白建議初始酶量1~2μl,反應(yīng)1小時,如果沒有完全消化,建議過夜處理。
注意事項:
本產(chǎn)品僅供研究使用,不適用于人或動物的診斷及治療用途。