背景：

   在生產(chǎn)O-糖基化生物藥物的過程中，由于核心GalNAc殘基的不完全加工，可能會出現(xiàn)Tn抗原（GalNAc以α連接的方式鏈接在絲氨酸/蘇氨酸上），有研究指出，Tn抗原可參與C型凝集素巨噬細胞半乳糖凝集素（MGL）結(jié)合，且MGL在樹突細胞和巨噬細胞中表達，因此Tn抗原與MGL的鏈接可能引起免疫抑制，幫助腫瘤實現(xiàn)免疫逃逸。

   α-N-乙酰半乳糖苷酶是一種高度特異性的外糖苷酶，可有效水解與糖蛋白（Tn抗原）中絲氨酸或蘇氨酸殘基連接的α-N-乙酰半乳糖胺（GalNAc），該酶還對α1-3連接的末端GalNAcs顯示活性。因此α-N-乙酰半乳糖苷酶可用于去除Tn抗原。

產(chǎn)品包裝：

   Rhinogen^? α-N-乙酰半乳糖苷酶包裝規(guī)格如下：

配套試劑：

   Rhinogen^?α-N-乙酰半乳糖苷酶提供的試劑如下：

   重組表達于E. coli，理論分子量約52KD，C端帶6×His標簽。

產(chǎn)品質(zhì)量：

   SDS-PAGE分析，純度≥95%；沒有檢測到污染的外切糖苷酶、糖苷內(nèi)切酶及蛋白酶活性。

產(chǎn)品特性：

   α-N-乙酰半乳糖苷酶（α-N-Acetylgalactosaminidase）是一種高度特異性的糖苷外切酶，可有效水解與糖蛋白中絲氨酸或蘇氨酸殘基連接的α-N-乙酰半乳糖胺（GalNAc）（Tn抗原），該酶還對α 1-3連接的末端GalNAc顯示活性。α-NAGA在天然條件下水解糖蛋白上的GalNAc。適用pH值范圍6.0到7.6，不需要輔助因子或特殊緩沖體系。

酶活定義：

   α-N-乙酰半乳糖苷酶能從4-Nitrophenyl N-acetyl-alpha -D-galactosaminide中裂解α-N-乙酰基半乳糖胺基，通過402nm檢測釋放PNP的量來定義酶活，在所述條件下（20mM Tris，pH6.8）每個活力單位每分鐘能釋放≥600pmol PNP。

保藏條件：

   1. 采用冰袋運輸， 長期儲存請置于-20℃，重懸后2-8℃可保存1個月。
   2. 避免反復(fù)多次凍融和頻繁的溫度變化。

應(yīng)用：

   1.從糖肽及糖蛋白上釋放完整的Tn抗原；
   2.對 O-糖基化生物藥物進行 Tn 抗原表征；
   3.表征蛋白質(zhì)是否糖基化及去糖基化；
   4.糖蛋白測序及分析；
   5.糖蛋白重組表達。

特性：

   α-N-乙酰半乳糖苷酶在生理緩沖液和中性pH值中具有活性，使其與大多數(shù)樣品兼容。此外，α-N-乙酰半乳糖苷酶的活性不依賴于可能損害LC-MS分析的任何輔助因子，例如BSA。根據(jù)糖蛋白底物的性質(zhì)，孵育時間為2~18h。

實驗準備：

   使用反應(yīng)緩沖液中將糖蛋白底物調(diào)整至0.5-5.0mg/ml。

糖蛋白消化：

   以2000U/支產(chǎn)品為例：
   1、使用100μl ddH2O重懸凍干粉至20U/μl；
   2、以1U α-N-乙酰半乳糖苷酶/1μg糖蛋白的比例添加α-N-乙酰半乳糖苷酶；
   3、37℃孵育2-18h。
   注意：根據(jù)底物類型適當優(yōu)化酶的濃度和孵育時間。

注意事項：