背景:
在生物制品的制備/生產(chǎn)過(guò)程中,去除DNA殘留是極為重要的。在過(guò)去幾年里,重組蛋白類生物藥物的發(fā)展突飛猛進(jìn),并且在未來(lái)依然前景廣闊。在微生物系統(tǒng)中,這些重組蛋白一般都是通過(guò)微生物的發(fā)酵,并且通過(guò)裂解微生物細(xì)胞而釋放出來(lái)。然而,在釋放出目標(biāo)產(chǎn)物的同時(shí),細(xì)胞裂解物會(huì)同時(shí)產(chǎn)生一些雜產(chǎn)物,比如宿主細(xì)胞蛋白、核酸(DNA以及RNA)、細(xì)胞內(nèi)毒素以及一些其他宿主細(xì)胞雜質(zhì)。重組蛋白藥物中的DNA殘留可能會(huì)給患者體內(nèi)帶入激活的致癌基因,或者作為潛在的感染病毒DNA致使患者被感染。因此,DNA殘留量是重組蛋白藥物的一個(gè)重要的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。世界上許多權(quán)威機(jī)構(gòu)都對(duì)重組蛋白類藥物中的宿主DNA殘留量做出了嚴(yán)格的規(guī)定,對(duì)于每支疫苗中的DNA殘留量,WHO規(guī)定不可以超過(guò)l0ng,美國(guó)FDA規(guī)定不可以超過(guò)l0pg,我國(guó)規(guī)定為l00pg以下。
NuclecutTM 全能核酸酶(SuperNuclease),是一種核酸內(nèi)切酶,可將核酸降解成2~5個(gè)堿基的5'-單磷酸核苷酸,因其能高效降解任何形式(雙鏈,單鏈,線狀,環(huán)狀)的DNA和RNA而沒(méi)有蛋白裂解活性,因此被稱為“全能核酸酶”。全能核酸酶能有效降低蛋白樣品粘度,去除蛋白樣品中核酸的污染,且無(wú)蛋白酶活性殘留,NuclecutTM 全能核酸酶活性達(dá)1×106U/mg蛋白。全能核酸酶在降低粘性的同時(shí),也具有多種其他用途,如:減少了樣品處理時(shí)間、增加了蛋白產(chǎn)量、離心時(shí)沉淀和上清分離的更徹底、更便于溶液的離心(尤其是超濾)、提高色譜純化的效率等。
概述:
該酶在0~42℃的均有活性,最適溫度為37℃;有效的pH范圍為6.0-10.0,最適pH為8.0;發(fā)揮活性需要Mg2+存在,1-2mM為最佳;在去污劑、SDS、尿素等存在下仍然保持一定活性。全能核酸酶可以非特異性裂解單鏈以及雙鏈的DNA和RNA,并切割出一個(gè)3'-OH和5'-磷酸基。
產(chǎn)品包裝:
NuclecutTM 全能核酸酶(SuperNuclease)包裝規(guī)格如下:
目錄號(hào) | 規(guī)格 |
RA-NC01-A |
10KU |
RA-NC01-B |
50KU |
RA-NC01-C |
500KU |
產(chǎn)品儲(chǔ)存于20mM Tris-HCI,pH8.0,2mM MgCl2,20mM NaCl和50%(v/v)甘油中,不添加防腐劑。
產(chǎn)品來(lái)源:
NuclecutTM 全能核酸酶序列來(lái)源于Serratia marcescens,重組表達(dá)于E. coli,單體理論分子量約27.5KD,C端帶6×His標(biāo)簽。
產(chǎn)品特性:
NuclecutTM 全能核酸酶可非特異性降解所有形式的DNA和RNA(單鏈的、雙鏈的、線性的和環(huán)化的),將核酸完全消化為長(zhǎng)度為3至5個(gè)堿基的5'-單磷酸末端寡核苷酸。
產(chǎn)品質(zhì)量:
1. 高純度:通過(guò)SDS-PAGE檢測(cè),純度≥90%;
2. 高穩(wěn)定性:每批產(chǎn)品都經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制,以實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品批間穩(wěn)定性。
3. 無(wú)蛋白酶活性:偶氮酪蛋白法分析無(wú)蛋白酶活性。
儲(chǔ)存條件:
采用干冰運(yùn)輸,收到產(chǎn)品后請(qǐng)立即將其置于-20℃保存。復(fù)溶后可適當(dāng)分裝以減少多次凍融帶來(lái)的活性損失。
應(yīng)用:
1. 從蛋白質(zhì)和其他生物制劑中去除DNA / RNA;
2. 降低由核酸引起的粘度;
3. 在二維凝膠電泳和色譜中制備樣品;
4. 防止細(xì)胞結(jié)塊;
5. 降低哺乳動(dòng)物細(xì)胞提取物的粘度;
6. 降低大腸桿菌細(xì)胞裂解液的粘度以增強(qiáng)過(guò)濾性。