背景：

       β1-4 Galactosidase是一類重要的糖基化研究的工具酶。Rhinogen^? β1-4 Galactosidase是將β1-4 Galactosidase 基因重組并表達(dá)于大腸桿菌BL21中的重組酶，能夠催化寡糖或者糖蛋白非還原末端的β1-4連接的半乳糖殘基的水解，如圖1 所示。

圖1 β1-4 Galactosidase的酶切位點(diǎn)

包裝規(guī)格：

       Rhinogen^? β1-4 Galactosidase包裝規(guī)格如下：

儲(chǔ)存體系：

       QPF-006儲(chǔ)存在緩沖液中，以液體的形式提供。緩沖液的組成為：50 mM NaCl, 20 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA (pH 7.5, 25°C)。

配套試劑：

       Rhinogen^? β1-4 Galactosidase提供的配套試劑如下：

產(chǎn)品來(lái)源：

       Rhinogen^? β1-4 Galactosidase是一種將來(lái)β1-4 Galactosidase基因重組并表達(dá)于大腸桿菌BL21中的重組酶，分子量大小約為94KD。

產(chǎn)品質(zhì)量：

       SDS-PAGE分析，純度≥95%；沒有檢測(cè)到污染的糖苷外切酶、糖苷內(nèi)切酶及蛋白酶的活性。

產(chǎn)品特性：

       最適反應(yīng)pH為6.0。失活條件：65°C處理10 min。

酶活定義：

       1個(gè)酶活力單位定義：在37°C，pH5.5條件下，1分鐘內(nèi)催化水解1 μmol 鄰硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷所需要的酶量。

       1U Rhinogen^? β1-4 Galactosidase =1 U Prozyme Glyko^? β(1-4)-Galactosidase。不同公司產(chǎn)品的酶活力單位換算，請(qǐng)參考活力單位轉(zhuǎn)換表，如下：

應(yīng)用：

1. 聚糖結(jié)構(gòu)分析；

2. 治療性重組蛋白的表征及質(zhì)量控制；

3. 消除糖蛋白的異質(zhì)性。

使用建議：

1. 取1μg糖蛋白或者100nM寡糖樣品，加純化水至反應(yīng)體系為9μl；

2. 加入1μl 10×Glyco緩沖液1；

3. 加入1μl Rhinogen^? β1-4 Galactosidase，輕柔混勻；

4. 37°C 條件下反應(yīng)1小時(shí)。 

操作說(shuō)明：

1. 反應(yīng)體系可以線性放大或縮小；

2. 對(duì)于不同的糖蛋白樣品，需要進(jìn)行適當(dāng)優(yōu)化或根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定最優(yōu)的操作方法。在10-25μl反應(yīng)體系中，對(duì)于1μg糖蛋白建議初始酶量1-2μl反應(yīng)1小時(shí)，如果沒有完全消化，建議過(guò)夜處理；

3. pNP- βGal是有效的陽(yáng)性對(duì)照底物。

4. 如果天然及脫半乳糖殘基的糖蛋白分子大小在凝膠上的差異足以進(jìn)行區(qū)分，則SDS-PAGE可以用來(lái)評(píng)估糖蛋白糖基化程度及去糖基化程度；

5. 如果要對(duì)β1-4 Galactosidase切割后的聚糖進(jìn)行分離回收，糖蛋白的底物濃度應(yīng)約為10-20μM，適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間；

6. 本產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人或動(dòng)物的診斷及治療用途。