Rhinogen? α2-3,6,8,9 Neuraminidase產(chǎn)品具有穩(wěn)定性高、比活性高等特點(diǎn),是一種高度純化和非常穩(wěn)定的外切糖苷酶,適用于蛋白質(zhì)組學(xué)及糖生物學(xué)研究中糖蛋白上所有非還原末端的唾液酸殘基有效釋放。
高純度:沒(méi)有污染蛋白酶/其它糖苷酶,純度≥95%;
高穩(wěn)定性:每批α2-3,6,8,9 Neuraminidase產(chǎn)品都經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制,以實(shí)現(xiàn)高穩(wěn)定性;
高比活性:有效和完全的釋放所有非還原末端的唾液酸殘基。
背景:
N-糖基化及O-糖基化是兩種主要的糖基化修飾形式,N-連聚糖以三甘露五糖核心與蛋白質(zhì)上的天冬酰胺(Asn)殘基的酰胺側(cè)鏈相連,而O-連聚糖以Core 1或Core 3的二糖核心與Ser或Thr殘基的羥基側(cè)鏈相連。這些N-或O-聚糖鏈上的末端殘基通常都是唾液酸,對(duì)糖蛋白的糖基化研究必不可少的第一步通常都是除去所有非還原末端的唾液酸殘基。α2-3,6,8,9 Neuraminidase能夠釋放糖蛋白,糖脂,神經(jīng)節(jié)苷脂及多糖上所有直鏈或支鏈非還原末端的唾液酸殘基。是一類(lèi)重要的糖基化研究的工具酶,廣泛用于糖蛋白和糖脂的分析。
Rhinogen? α2-3,6,8,9 Neuraminidase是一種將α2-3,6,8,9 Neuraminidase 基因重組并表達(dá)于大腸桿菌BL21中的重組酶。在無(wú)糖苷酶本底表達(dá)的大腸桿菌宿主中表達(dá)的重組α2-3,6,8,9 Neuraminidase是高度純化的酶制劑,能夠釋放α (2,3)-, α (2,6)-, α (2,8)-, α (2,9)-唾液酸殘基,如圖1,不同唾液酸殘基的釋放速率大致為α (2,6)->α (2,3)- >α (2,8)- >α (2,9)-,通過(guò)加入足夠的酶,釋放的速率差異并不影響它在實(shí)際應(yīng)用中的完全非特異性去除唾液酸殘基的性質(zhì)。
圖1. Rhinogen? α2-3,6,8,9 Neuraminidase作用位點(diǎn)
產(chǎn)品包裝:
Rhinogen? α2-3,6,8,9 Neuraminidase包裝規(guī)格如下:
目錄號(hào) |
規(guī)格 |
濃度 |
QPF-005-A |
0.6U/30μl |
20U/ml |
QPF-005-B |
5×0.6U/30μl |
20U/ml |
儲(chǔ)存體系:
QPF-005儲(chǔ)存在緩沖液中,以液體的形式提供。緩沖液的組成為:50 mM NaCl,20 mM Tris-HCl (pH 7.5 at 25°C),1 mM EDTA。
配套試劑:
Rhinogen? α2-3,6,8,9 Neuraminidase 提供的配套試劑如下:
試劑 |
成分 |
規(guī)格 |
10×Glyco緩沖液1 |
50 mM CaCl2、500 mM sodium acetate, pH 5.5 at 25°C |
1ml |
產(chǎn)品來(lái)源:
Rhinogen? α2-3,6,8,9 Neuraminidase 是一種將α2-3,6,8,9 Neuraminidase基因重組并表達(dá)于大腸桿菌BL21中的重組酶,分子量大小為66KD。
產(chǎn)品質(zhì)量:
SDS-PAGE分析,純度≥95%;沒(méi)有檢測(cè)到污染的外切糖苷酶、內(nèi)切糖苷酶及蛋白酶活性。
產(chǎn)品特性:
反應(yīng)適宜pH范圍:4.5-7,最適反應(yīng)pH:5.5;熱失活條件:65°C處理10 min。
酶活定義:
1個(gè)酶活力單位定義:在37°C,pH5.5條件下,以對(duì)硝基苯基-α-D-N-乙酰神經(jīng)氨酸為底物,1分鐘內(nèi)催化釋放1 μmol 對(duì)硝基苯酚所需要的酶量。
1U Rhinogen? α2-3,6,8,9 Neuraminidase =1 U Prozyme Glyko? Sialidase ATM。不同公司產(chǎn)品的酶活力單位換算,請(qǐng)參考活力單位轉(zhuǎn)換表,如下:
Enzyme |
Company |
Selling Conc. (U/ml) |
Units /Vial |
μl/ Vial |
Rhinogen? Assay (U/ml) |
Rhinogen? Assay Units /Vial |
μl Conversion (1 Rhinogen? μl = x Company μls) |
α2-3,6,8,9 Neuraminidase |
Rhinogen? (QPF-005) |
20 |
0.6 |
30 |
20 |
0.6 |
1 |
NEB (NEB #P0722) |
20,000 |
800 |
40 |
20 |
0.8 |
1 |
|
NEB (NEB #P0720) |
50,000 |
2,000 |
40 |
50 |
2 |
0.4 |
|
Prozyme (GKX-5021)α2-3, 6, 8 Neur) |
5 |
1 |
200 |
10 |
2 |
2 |
|
Prozyme (GK80040, α2-3,6,8,9 Neur) |
5 |
1 |
200 |
5 |
1 |
4 |
儲(chǔ)存條件:
-20℃條件下,避免反復(fù)凍融。
產(chǎn)品特點(diǎn):
Rhinogen? 提供的α2-3,6,8,9 Neuraminidase產(chǎn)品具有穩(wěn)定性高、比活性高等特點(diǎn),是一種高度純化和非常穩(wěn)定的外切糖苷酶,適用于蛋白質(zhì)組學(xué)及糖生物學(xué)研究中糖蛋白上所有非還原末端的唾液酸殘基有效釋放。
1. 高純度:沒(méi)有污染蛋白酶/其它糖苷酶,純度≥95%;
2. 高穩(wěn)定性:每批α2-3,6,8,9 Neuraminidase產(chǎn)品都經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制,以實(shí)現(xiàn)高穩(wěn)定性;
3. 高比活性:有效和完全的釋放所有非還原末端的唾液酸殘基。
應(yīng)用:
1. 聚糖結(jié)構(gòu)分析;
2. 涉及唾液酸的病理生理學(xué)研究;
3. 治療性重組蛋白的表征及質(zhì)量控制;
4. 癌癥研究及異常唾液酸化的鑒定及體外診斷;
5. 消除糖蛋白的異質(zhì)性。
唾液酸酶有很多種,Rhinogen? 的唾液酸酶跟市面上的有什么區(qū)別?
市面上常見(jiàn)的唾液酸酶有α2-3、 α2-3, 6-、α2-3,6,8-及 α2-3,6,8,9-等4種:
1) α2-3Neuraminidase能夠切割釋放α2-3連唾液酸殘基;
2) α2-3, 6 Neuraminidase能夠切割釋放α2-3, α2-6 連唾液酸殘基;
3) α2-3,6,8 Neuraminidase能夠切割釋放α2-3, α2-6 , α2-8 連唾液酸殘基;
4) α2-3,6,8,9 Neuraminidase能夠切割釋放α2-3, α2-6 , α2-8, α2-9連唾液酸殘基,它還可以切割與內(nèi)部殘基連接的支鏈唾液酸殘基,Rhinogon? 目前只有這一種唾液酸酶,是一種應(yīng)用最廣泛、適用性更廣的酶。
α2-3,6,8,9 Neuraminidase有效的陽(yáng)性對(duì)照底物?
Fetuin或 pNP-N-乙酰神經(jīng)氨酸是α2-3,6,8,9 Neuraminidase的有效陽(yáng)性對(duì)照底物。
α2-3,6,8,9 Neuraminidase可以同時(shí)與其他外切糖苷酶和/或內(nèi)切糖苷酶進(jìn)行雙重消化嗎?
是的,可以同時(shí)使用。 與其它外切糖苷酶同時(shí)使用時(shí),建議采用1× Glyco緩沖液 1(50mM乙酸鈉, 5mM CaCl 2,pH5.5)緩沖體系; 與PNGase F和/或O-Glycosidase同時(shí)使用時(shí),建議使用1×Glyco緩沖液 2(50 mM磷酸鈉,pH 7.5)。
Neuraminidase對(duì)糖蛋白樣品的去唾液酸化是否要求變性條件?
不需要,通常去糖基化的酶都可以從天然(折疊)糖蛋白上去除聚糖殘基,然而由于空間位阻效應(yīng)(蛋白質(zhì)的二級(jí)或三級(jí)結(jié)構(gòu)),聚糖位點(diǎn)周?chē)牡鞍踪|(zhì)可能會(huì)影響一些酶的可及性,對(duì)于PNGase F 及O-Glycosidase,變性條件下去糖基化效率會(huì)得到較大的提高,但是對(duì)于Neuraminidase,變性及天然狀態(tài)下,去唾液酸的效率相差不大。
Rhinogen? α2-3,6,8,9 Neuraminidase是否可以切割釋放N-乙酰神經(jīng)氨酸(Neu5Ac)和N-羥乙酰神經(jīng)氨酸(Neu5Gc)殘基?
Rhinogen? α2-3,6,8,9 Neuraminidase既可以切割Neu5Ac,又可以切割Neu5Gc,但相對(duì)Neu5Ac,其對(duì)Neu5Gc具有稍低的切割效率。