背景：

   FabCOUPER protease是一種絲氨酸蛋白酶，重組表達于E.coli，C端帶6×His標簽?？稍阢q鏈上方的單個位點特異性消化人IgG1，無需還原條件即可在兩小時內(nèi)產(chǎn)生完整的Fab和Fc片段。

包裝規(guī)格：

Rhinogen^? FabCOUPER protease包裝規(guī)格如下：

   產(chǎn)品儲存于50 mM Tris-HCl, 150mM NaCl, 1mM EDTA，pH7.6, 不添加防腐劑。

產(chǎn)品來源：

Rhinogen^? FabCOUPER protease重組表達于E. coli，理論分子量約71.82KD。

產(chǎn)品特性：

Rhinogen^? FabCOUPER protease是一種蛋白酶，可在鉸鏈上方的單個位點特異性消化人IgG1，無需還原條件即可在兩小時內(nèi)產(chǎn)生完整的Fab和Fc片段。該酶對具有突變鉸鏈區(qū)的抗體（例如LALA突變）具有活性。

酶活定義：

在50mMTris-HCl，150mM NaCl，10mM CaCl2，pH7.6條件下，37℃孵育2小時，1單位酶（1U）可消化1μg人IgG1的≥90%，通過SDS-PAGE確認。

儲存條件：

1. 冷藏運輸，到達時應(yīng)儲存在-70℃- -20℃條件下；

2. 由于FabCOUPER protease具有自降解活性，解凍后應(yīng)保持低溫并盡量在的同一天使用。同時可適當分裝后凍存，避免多次凍融。

應(yīng)用：

突變抗體和Fc融合蛋白消化及結(jié)構(gòu)分析。

使用建議：

實驗準備：

1. 配制消化緩沖液：50mM Tris-HCl，150mM NaCl，pH7.6；

2. 使用前，請將Rhinogen? FabCOUPER protease從-20℃取出解凍，瞬離備用；

3. 將20×CaCl2從-20℃取出解凍，瞬離備用。

操作說明：

1. 使用消化緩沖液將人IgG1調(diào)整至0.5-5.0mg/ml；

2. 按1U FabCOUPER protease/1μg人IgG1的比例進行消化，確保最終反應(yīng)體系中含有10mM CaCl2；

3. 以消化100μg人IgG1（2mg/ml）為例，將50μl人IgG1加入到EP管中，加入5μl FabCOUPER protease（20U/μl），加入5μl 20×CaCl2，加入40μl 消化緩沖液補足至100μl；

4. 輕柔混勻后瞬離，37℃條件下反應(yīng)2小時。

注意：1）根據(jù)底物的不同，可能需要優(yōu)化酶的用量和消化時間；

          2）反應(yīng)可以線性放大或縮小；

          3）酶液可以適當稀釋。